酶標(biāo)儀
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即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(ELISA Reader)是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器.可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來(lái)分析抗原或抗體的含量. ELISA測(cè)定一般要求測(cè)試液的最終體積在250u l以下,用一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求.
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法,是標(biāo)記技術(shù)中的一種,是從熒光抗體技術(shù)、同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來(lái)的一種敏感,特異,快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù).
酶標(biāo)法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)抗原或抗體, 此酶標(biāo)抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng),并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復(fù)合物.當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí),底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色.顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比.
由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上,因此,具有高度的靈敏性和特異性,是一種極富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù).
目錄 |
酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)
和光電比色計(jì)基本相同.
圖示是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器
變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透
過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)
的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理
和計(jì)算,最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.
微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)
現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè),因此省去了X,Y
方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單.
微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的
小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液.其常見(jiàn)
規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對(duì)其可進(jìn)行一孔
一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè).
酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過(guò)相干濾光片來(lái)獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來(lái)得
到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在
微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)圖.光源燈發(fā)出的光經(jīng)
聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過(guò)比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到
光電管.
從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:
(l)盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的
聚乙烯材料制成,對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.
(2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過(guò),因此酶標(biāo)儀的光來(lái)都
是垂直通過(guò)待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液.
(3)酶標(biāo)儀通常不僅用A,有時(shí)也使用光密度OD來(lái)表示吸光度.
酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分自動(dòng)型的儀器
有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試,手動(dòng)型則
靠手工移動(dòng)微孔板來(lái)進(jìn)行測(cè)量.
在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)僅,此類酶標(biāo)僅一般都是自動(dòng)化型的.它沒(méi)
有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器,如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源,12個(gè)檢測(cè)
器和12個(gè)放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下,樣品12個(gè)為一排被檢測(cè).多通道酶標(biāo)
儀的檢測(cè)速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高.
摘自《陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)》1998.13(4)12
摘要 為提高酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的室內(nèi)重復(fù)性和增強(qiáng)室間可比性，對(duì)已建立的酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定的基本方法進(jìn)行了詳細(xì)解釋和補(bǔ)充，以供同行在評(píng)價(jià)、鑒定儀器時(shí)參考與應(yīng)用?！ ?/p>
酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)
1、工作環(huán)境
酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長(zhǎng)其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例，儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635－19條例：
儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽(yáng)光直射。
操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間。
操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。
保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，以及足夠的操作空間。
2、操作注意事項(xiàng)
酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果，操作過(guò)程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣，會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：
使用加液器加液，加液頭不能混用。
洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。
嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
在測(cè)量過(guò)程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。
請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。
如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試
劑盒的操作說(shuō)明，以防對(duì)操作人員造成損害。
如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。
對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。
使用后蓋好防塵罩。
出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀?！ ?/p>
酶標(biāo)儀及洗板機(jī)選購(gòu)指南
酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。
酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高。
目前國(guó)內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目，如：乙肝五項(xiàng)、愛(ài)滋病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法，報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲檢測(cè)試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對(duì)照品的OD值×2.5，通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過(guò)臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過(guò)另一孔顏色的2.5倍就不可能。
國(guó)內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說(shuō)明書沒(méi)有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶免檢測(cè)的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變（如：肝炎、愛(ài)滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、愛(ài)滋等EIA試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。
我國(guó)免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場(chǎng)上的情況如下：
方法所處市場(chǎng)周期
放免衰退期
酶免成長(zhǎng)期
發(fā)光進(jìn)入期
放免技術(shù)由于試劑的污染和有效期等問(wèn)題在國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)逐漸被淘汰，而化學(xué)發(fā)光試劑和設(shè)備比較昂貴，使得其在國(guó)內(nèi)的普及特別在計(jì)生系統(tǒng)普及需要較長(zhǎng)時(shí)間，EIA技術(shù)穩(wěn)定，試劑價(jià)格合理，供應(yīng)充，酶免技術(shù)在中國(guó)市場(chǎng)處于成長(zhǎng)期，因此購(gòu)買酶標(biāo)儀正合適宜。
尤其要提到的是，在中國(guó)的計(jì)劃生育和婦幼保健系統(tǒng)配備酶標(biāo)儀已經(jīng)迫在眉睫。早在幾年以前,世界衛(wèi)生組織已建議對(duì)孕婦進(jìn)行TORCH 五項(xiàng)常規(guī)篩查，但是遺憾的是由于缺乏酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等設(shè)備，RCH的檢測(cè)在中國(guó)還未能普遍開展。TORCH感染在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中稱為TORCH綜合癥，由于孕婦,胎兒和新生兒都易被感染,它已受到全世界婦產(chǎn)科和兒科的極大重視。
妊娠期感染不僅危害母體，往往還可對(duì)胎兒和新生兒產(chǎn)生嚴(yán)重影響。通過(guò)胎盤可引起子宮內(nèi)感染而導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或胎兒生長(zhǎng)遲緩和畸形，通過(guò)產(chǎn)道和母乳可引起新生兒感染。如累及神經(jīng)系統(tǒng)可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰ORCH感染與優(yōu)生優(yōu)育有極為重要的關(guān)系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱為優(yōu)生優(yōu)育十項(xiàng)檢查。目前，TORCH的檢測(cè)方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要特殊儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，簡(jiǎn)單快速，成本低等優(yōu)點(diǎn)，只要配備有酶標(biāo)儀和其他相應(yīng)的設(shè)備，多數(shù)普通實(shí)驗(yàn)室均可方便地開展。很顯然,盡快在計(jì)生系統(tǒng)普及酶標(biāo)儀等設(shè)備是一個(gè)迫切的需求。
這項(xiàng)工作的落實(shí)將有助于提高診治水平，降低母嬰發(fā)病率，從而提高整個(gè)國(guó)民的健康素質(zhì)。目前市場(chǎng)上提供的EIA試劑越來(lái)越多，如：T3、 T4、TSH、TORCH系列、不孕系列、各種癌癥標(biāo)志物、傷寒、副傷寒等，另外通過(guò)母嬰傳播的性傳播疾病(如淋病、梅毒、HIV)和肝炎（如HBV、 HCV)，以及胎兒的抗體，新生兒TSH的測(cè)定，疫苗反應(yīng)等，市場(chǎng)上也都有成套EIA試劑盒供應(yīng)。使用酶標(biāo)儀有利于拓展檢測(cè)項(xiàng)目，提高檢測(cè)水平，其社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益并舉。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法,是標(biāo)記技術(shù)中的一種,是從熒光抗體技術(shù)、同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來(lái)的一種敏感,特異,快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù).
酶標(biāo)儀的應(yīng)用范圍
分類 項(xiàng)目名稱 簡(jiǎn) 稱
血液學(xué)檢驗(yàn) 血小板相關(guān)抗體的檢驗(yàn) PAIgA、PAIgG、PAIgM
D-二聚體的測(cè)定 D-Dimer
血清纖維蛋白降解產(chǎn)物的測(cè)定 FDP
免疫學(xué)檢驗(yàn) C反應(yīng)蛋白的測(cè)定 CRP
免疫球蛋白的測(cè)定 IgD、IgE
循環(huán)免疫復(fù)合物的測(cè)定 CIC
類風(fēng)濕因子的測(cè)定 IgG、IgA、IgM類RF
腫癌免疫學(xué)檢測(cè) 甲胎蛋白的測(cè)定 AFP
癌胚抗原的測(cè)定 CEA
前列腺特異抗原的測(cè)定 PSA
卵巢癌的測(cè)定 CA125
乳腺癌的測(cè)定 CA15-3
宮頸鱗癌的測(cè)定 SCC
多發(fā)性骨髓癌的測(cè)定
甲狀腺癌的測(cè)定 hTG
傳染病免疫學(xué)檢驗(yàn) 甲肝血清學(xué)的檢測(cè) 抗HAV-IgM
乙肝血清學(xué)的檢測(cè) 兩對(duì)半
丙肝血清學(xué)的檢測(cè) 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM
丁肝血清學(xué)的檢測(cè) 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM
戊肝血清學(xué)的檢測(cè) 抗HEV-IgG
乙型腦炎病毒抗體的檢測(cè) IgM
人類免疫缺陷病毒抗體（即區(qū)滋?。┑臋z測(cè) HIV β 2 M
優(yōu)生優(yōu)育功能檢測(cè) 弓形蟲（體）病毒的檢測(cè) TOXO
風(fēng)疹病毒的檢測(cè) RV
巨細(xì)胞病毒的檢測(cè) CMV
單純皰病毒的檢測(cè) 抗HSV（Ⅰ、Ⅱ）
其 它 本儀器還可做基因檢驗(yàn)及獸殘、農(nóng)殘檢驗(yàn)項(xiàng)目等
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